質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的具體操作步驟及其注意事項

　　質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，相信大家都不會陌生，在我們進(jìn)行哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(dá)和昆蟲細(xì)胞表達(dá)中都會用到這個過程，可以說轉(zhuǎn)染的效果直接影響到我們后期實驗的成敗。今天普健生物就和大家具體聊聊質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以及在操作過程中需要注意到的一些事項，以便于大家更好地進(jìn)行實驗。

　　昆蟲細(xì)胞擴(kuò)大轉(zhuǎn)染

　　1、挑選狀態(tài)良好的細(xì)胞(選取活力在98%以上且在生長期內(nèi)的)，將其放置于細(xì)胞培養(yǎng)的六孔板上，平均90萬/空孔;

　　2、將細(xì)胞房在29度的培養(yǎng)皿上靜置半小時，在細(xì)胞完全貼壁后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染;

　　3、轉(zhuǎn)染;

　　4、轉(zhuǎn)染體系之后，再將其放置在室溫下培養(yǎng)半小時以上;

　　5、孵育完成之后，再將其滴加到準(zhǔn)備好的6孔板中;

　　6、在六孔板內(nèi)培養(yǎng)4-6天后，取其上清液即可得P1代病毒;

　　轉(zhuǎn)染過程中需要注意哪些事項?

　　1、細(xì)胞的密度

　　一般保持細(xì)胞密度在70%-90%時進(jìn)行轉(zhuǎn)染最好，過高或過低都會對轉(zhuǎn)染的效果造成影響(細(xì)胞鋪板和轉(zhuǎn)染最好當(dāng)天進(jìn)行);

　　2、細(xì)胞的狀態(tài)

　　盡量選擇適度傳代的細(xì)胞，而且不同批次的實驗也盡量選擇相同傳代次數(shù)的細(xì)胞。而且細(xì)胞盡量保持均勻且密度一致，盡量確保不要選擇被支原體污染的細(xì)胞;

　　3、細(xì)胞種類的選擇

　　不同的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染是所需要的體系是各不相同的，如果我們在一種體系上使用不同的細(xì)胞，納米，其所得的結(jié)果是各不相同的。所以，同一種體系，盡量用同一種細(xì)胞;

　　4、轉(zhuǎn)染試劑選擇

　　試劑的選擇一般我們都要遵循高效、方便、低價、低毒，一般來說，每種轉(zhuǎn)染試劑都有相應(yīng)的成功文獻(xiàn)，我們完全可以按照那個來選擇;

　　質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雖然是基礎(chǔ)性的實驗，但是，它卻制約著我們的實驗是否成功的關(guān)鍵，所以，還是要花費不少心思的。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供哺乳動物細(xì)胞表達(dá)以及昆蟲細(xì)胞表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。