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在蛋白純化的過(guò)程中，我們常常會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，有的是因?yàn)椴僮髦谐霈F(xiàn)問(wèn)題導(dǎo)致，有的是因?yàn)樯a(chǎn)環(huán)境變動(dòng)導(dǎo)致，還有一些卻是正常的情況。當(dāng)遇到這些問(wèn)題的時(shí)候，我們可以根據(jù)日?？偨Y(jié)的一些經(jīng)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行相應(yīng)的處理。今天，普健生物就和大家聊聊有關(guān)蛋白純化中出現(xiàn)沉淀的情況分析及其解決辦法。
一般在遇到這種情況時(shí)，我們常常有兩種方法來(lái)予以處理。
方法一：復(fù)溶沉淀蛋白。通過(guò)成倍地加入稀釋液來(lái)稀釋重懸蛋白，并加入終濃度為1.5M Nacl和100mlMDTT，搖晃5min后，所得結(jié)果就會(huì)好很多;
這個(gè)方法能夠解決一部分蛋白洗脫后沉淀的問(wèn)題，但是由于加入的Nacl和DTT，可能會(huì)對(duì)之后的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響，所以需要采用透析法去除后才能繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn);
方法二：重新制備蛋白。何種方法為方法一的升級(jí)版，再添加緩沖液的時(shí)候，使用功能1M Nalc和10%的甘油，而后再通過(guò)離心的方式獲得上清液，最后再用10ml洗脫緩沖液重懸填料;
總的來(lái)說(shuō)，蛋白洗脫后沉淀的現(xiàn)象非常的常見(jiàn)，最主要的原因是蛋白的濃度過(guò)高，使得蛋白和蛋白之間相互作用的機(jī)會(huì)增多而形成蛋白聚合體。所以，一般這個(gè)時(shí)候我們可以考慮通過(guò)稀釋來(lái)處理。通常，我們可以考慮加入高濃度Nacl、高濃度DTT或甘油的方式來(lái)處理。普健生物為廣大用戶提供專(zhuān)業(yè)的蛋白純化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。
