有關(guān)重組蛋白表達和純化功能方面的分析

　　在我們進行相應(yīng)的蛋白制備工作時，表達成功可以說是至關(guān)重要的，但是一些細(xì)節(jié)方面的工作如果做得好的話，下游實驗中應(yīng)用起來會變得更方便。不僅僅能提升蛋白的水溶性，而且可以在極大程度上節(jié)約時間。具體操作，普健生物在下面和大家一一道來。

　　選擇正確的標(biāo)簽可以說是一項艱巨的任務(wù)，因為合適的標(biāo)簽不僅能幫我們獲得可溶性蛋白，而且能夠方便我們純化的方案，且不會對后續(xù)的實驗造成影響。在這里，我們唯一需要擔(dān)心的事情就是那個標(biāo)簽有助于目標(biāo)蛋白的溶解、表達及純化，因為標(biāo)簽本身是可以切除的，所以，不用擔(dān)心它會干擾到蛋白。

　　硬性蛋白可溶性的三個關(guān)鍵參數(shù)：

　　IPTG濃度

　　在不同濃度下，蛋白的特性是不一樣的。但是我們需要注意，不要改變細(xì)胞中蛋白的折疊功能。在日常實驗中，我們可以考慮多嘗試幾個不同的濃度，選擇一個最高可溶性蛋白的產(chǎn)量;

　　溫度

　　偶爾我們在37度的典型溫度下，通過生長和誘導(dǎo)分離的方式來分離蛋白。當(dāng)然了，我們也可以試試在較低溫度下進行增強，比如嘗試30度、25度、18度等溫度下進行誘導(dǎo);

　　誘導(dǎo)時間

　　誘導(dǎo)時間并不是說越長越好，因為宿主細(xì)胞會對蛋白會造成一定的降解，毒蛋白更甚。所以，在誘導(dǎo)期間，我們需要隔幾個小時進行取樣，并檢測蛋白的表達情況。一般來說，37度時4小時最佳，30度5-6小時最佳，25度情況下可以允許過夜;

　　當(dāng)然了，在正式投入使用之前，我們可以對其進行預(yù)實驗，通過各種不同的實驗進行測試，選擇一種最合適的方式來投入到后期的實驗中。當(dāng)各種方法都無法達到預(yù)期時，我們可以考慮只表達一部分蛋白，或者選擇不同的表達系統(tǒng)來進行表達，最后甚至可以考慮采用調(diào)整各種變性條件下的純化。總之，無論用什么辦法，達到自己的要求即可。更多蛋白表達方面的知識，敬請關(guān)注普健生物。