普健生物-盤點提升蛋白表達成功率的幾個方法

　　在蛋白表達過程中出現(xiàn)失敗的情況是很正常的，有很多人天天泡論壇，天天做實驗，但是蛋白表達的成功率依然不是很高，這是為什么呢?采用哺乳動物表達系統(tǒng)來表達蛋白，能夠客服修飾蛋白表達的問題，而且能夠?qū)崿F(xiàn)高度人源化，可用于結(jié)構(gòu)、功能分析等。

　　哺乳動物表達系統(tǒng)最常用的兩個方式是瞬時表達和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也就是我們常說的穩(wěn)定細胞系構(gòu)建，表達原理就是將外源基因轉(zhuǎn)染到細胞染色體生，讓其可以長期穩(wěn)定地生產(chǎn)蛋白。雖然說生產(chǎn)的蛋白質(zhì)量高且設(shè)計性強，但是，價格相對較高，周期長，操作難度也相對較大。所以，我們常用瞬時轉(zhuǎn)染來進行表達。

　　那么，如何提升瞬時表達的效率呢?

　　方法一：編碼優(yōu)化

　　根據(jù)應(yīng)用設(shè)計出最佳編碼序列，同時為其選擇最合適的表達載體，這樣，就能在極大程度上提升蛋白表達的成功率。也就是說，我們在開始蛋白表達之前，使用密碼子優(yōu)化算法，計算出合適的編碼序列，這樣可以節(jié)約時間、精力和成本;

　　方法二：提升溶解液濃度

　　很多時候，我們用來溶解蛋白的溶液濃度相對較低，使得蛋白表達量低，所以，出現(xiàn)這種問題的時候，我們可以考慮適當(dāng)提升一下溶解液的濃度;

　　方法三：搭配融合伴侶

　　我們可以適當(dāng)?shù)卦谥亟M蛋白中添加短肽序列，也就是我們常說的蛋白標簽。這種方法可以有效地提升蛋白的表達效率，而后再用酶切技術(shù)或者化學(xué)試劑去除掉標簽;

　　方法四：純化優(yōu)化

　　根據(jù)上下游蛋白需求和純度的不同，設(shè)計出不同的純化方法。比如蛋白表達量高，就可以考慮使用一步式親和純化。如果需要進一步地純化，則可以進行分子排阻色譜，如果在這個基礎(chǔ)上需要繼續(xù)純化的話，則可以考慮使用更高的純化方式;

　　總的來說，通過如上的四種方法可以在極大程度上提升蛋白表達的效率及成功率，當(dāng)然了，在日常實驗中，需要結(jié)合實際情況來選擇合適的方法。同時，我們在做實驗的時候，需要多注意一些細節(jié)方面的問題，比如溫度控制、PH值等等，這些細節(jié)都做好了，就能夠在更大程度上保障實驗的成功率。更多蛋白表達的知識，敬請關(guān)注普健生物。