單克隆抗體制備之雜交瘤細(xì)胞篩選的原理

　　在單克隆抗體制備的過(guò)程中，雜交瘤細(xì)胞的制備可謂重中之重，它的重要性自然不言而喻。但是，雜交瘤細(xì)胞的篩選則關(guān)系到我們產(chǎn)生蛋白的質(zhì)量以及相關(guān)成本問(wèn)題。在單克隆抗體制備的過(guò)程中，我們需要進(jìn)行兩次雜交瘤細(xì)胞的篩選，方法各不相同。下面，普健生物就和大家具體聊聊。

　　第一次篩選：

　　淋巴B細(xì)胞和骨髓細(xì)胞融合后即產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，之后的選擇性培養(yǎng)可謂第一次篩選成功與否的關(guān)鍵。一般我們會(huì)選擇HAT培養(yǎng)液進(jìn)行普通細(xì)胞的培養(yǎng)，一般采用兩條途徑：

　　1、生物合成途徑(D途徑)。通過(guò)氨基酸和其他小分子融合成的原料來(lái)供應(yīng)DNA分子的合成，其中也算作為輔酶參與這個(gè)過(guò)程，氨基蝶呤則會(huì)阻斷DNA合成，這個(gè)過(guò)程也就是我們常說(shuō)的D途徑;

　　2、應(yīng)急途徑(S途徑)。利用次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸酐轉(zhuǎn)移酶和胸腺嘧啶核糖核苷酸催化黃嘌呤和胸腺嘧啶合成相應(yīng)的核苷酸;

　　未融合的細(xì)胞在D途徑中會(huì)被氨基蝶呤阻斷，會(huì)因?yàn)槿狈Ψ敝衬芰Χ劳?在S途徑中會(huì)因?yàn)樽陨聿痪邆銼途徑而死亡;

　　第二次篩選：

　　一般采用有限稀釋克隆下?lián)艿姆椒?，將?xì)胞多倍稀釋后接種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，其上清液可與特定抗原結(jié)合的標(biāo)記為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞需要再次進(jìn)行有限稀釋操作，3-4次后，即可確認(rèn)其中的細(xì)胞為單克隆抗體。一般來(lái)說(shuō)，第二次篩選的過(guò)程也是一個(gè)鑒定的過(guò)程。

　　總的來(lái)說(shuō)，雜交瘤細(xì)胞的篩選需要進(jìn)行4-5次，這樣才能保證制備出來(lái)的細(xì)胞是合格的細(xì)胞，通過(guò)培養(yǎng)，產(chǎn)生的單克隆抗體才是我們需要的。但是這種方式制備出來(lái)的抗體因?yàn)橥獠織l件的變化，會(huì)導(dǎo)致不同批次生產(chǎn)出來(lái)的抗體存在著一定的差異。所以，如果需要多次生產(chǎn)同樣的抗體的話(huà)，我們需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來(lái)進(jìn)行制備。更多有關(guān)單克隆抗體制備方面的知識(shí)，敬請(qǐng)關(guān)注武漢普健生物。