經(jīng)典案例|普健大腸桿菌表達系統(tǒng)

發(fā)表時間：2022-11-24 訪問次數(shù)：515

重組蛋白表達系列二

大腸桿菌表達系統(tǒng)

展示案例：E.coli Expression System

在普健生物所擁有的五大蛋白表達系統(tǒng)中，眾所周知的基礎又經(jīng)濟的系統(tǒng)當屬原核的大腸桿菌表達系統(tǒng)了。

大腸桿菌表達系統(tǒng)因其代謝途徑和基因表達調(diào)控機制研究透徹、培養(yǎng)周期短、目標基因表達水平高且遺傳背景清楚，是目前市面上應用最廣泛的表達系統(tǒng)。

當然大腸桿菌君，優(yōu)點多多，缺點也明顯--就是讓廣大原核科研汪談之色變的包涵體。

而普健生物作為一家專注于蛋白表達技術的研究型高新技術企業(yè)，通過對E.coli表達系統(tǒng)的豐富經(jīng)驗以及熟練掌握，在E.coli系統(tǒng)上的蛋白可溶性表達成功率達到90%以上。

空口無憑，下面小編就給大家分享兩個案例：

CASE 1——PNGase F

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一種酰氨酶，可在 N-連糖蛋白的高甘露糖、雜合和復合寡糖部分最內(nèi)側(cè)的 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間進行切割。PNGase F幾乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有的 N-連接糖（X=H 或寡糖），不會去除常見植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。

PNGase F采用普健大腸桿菌表達系統(tǒng)成功可溶表達，產(chǎn)量高達107.1mg/L，純度>95%，經(jīng)檢驗活性較高。

P.S PNGase F酶有現(xiàn)貨哦，歡迎至普健生物官網(wǎng)留言訂購。

以圖為鑒

Test Report

Expression test

PNGase F protein have expressed in strain No.1 and strain No.2 , the most optimal expression yield for PNGase F in native is strain No.1 , 16℃.

Fermentation and Purification

1L scale up purification test

Target protein purification profile

SEC AKTA purification

SEC AKTA purification result part A

Final QC

SDS-PAGE of fragment of SEC AKTA purification

CASE 2——Co-expression CKM/CKB

肌酸激酶（CK）是一個重要的能量調(diào)節(jié)酶，可逆催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?，CK廣泛分布于心臟肌肉的包漿內(nèi)。CK有M和B兩個亞基組成，以此分為三個最基本的同工酶：CKMM、CKMB、CKBB。目前在臨床上應用最多的是將CK與CKMB結(jié)合，用于急性心肌梗塞的早期診斷；此外，CKBB蛋白也被應用在急性呼吸道感染、病毒性腹瀉等疾病的基礎研究中。

CKM/CKB采用普健大腸桿菌共表達系統(tǒng)實現(xiàn)可溶表達，并分別純化出有活性的CKMB和CKBB兩種酶，純度>95%。

P.S 該蛋白普健也有現(xiàn)貨哦，歡迎至普健生物官網(wǎng)留言訂購。

Purification Test(Mixture of CKBB and CKMB)