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RNAi 是由雙鏈RNA分子介導，特異性降解同源性mRNA使其表達沉默的過程，是一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默。RNAi技術(shù)日趨完善和成熟，目前已成為基因研究不可缺少的工具，并在功能基因組學、基因治療學等多領(lǐng)域發(fā)揮強大作用。
RNAi的實現(xiàn)首先需要制備性質(zhì)穩(wěn)定、作用持久的小分子RNA，siRNA和shRNA都是RNAi技術(shù)中常用的小分子RNA。
實現(xiàn)RNAi效應，載體系統(tǒng)的選擇同樣重要。
目前載體系統(tǒng)主要分為非病毒載體和病毒載體系統(tǒng)兩大類：非病毒載體具有低免疫原性、安全性較高的優(yōu)點，但其轉(zhuǎn)染效率往往較低；病毒載體因具有較高的轉(zhuǎn)染效率而更多地被用于基因功能研究。常用的病毒載體主要包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體等。
不同病毒載體對比：
| 載體種類 | 優(yōu)勢 | 不足 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒 | 易包裝獲得，免疫原性低，高效感染，目的基因穩(wěn)定地整合到靶細胞基因組而長期表達，且不產(chǎn)生輔助病毒。 | 滴度低，只能感染分裂期細胞。 |
| 腺病毒 | 轉(zhuǎn)基因效率高，宿主范圍較廣，能感染幾乎所有的細胞類型，能有效增殖，滴度高，遺傳毒性較低，安全性高。 | 目的基因不能整合進宿主細胞基因組。 |
| 腺相關(guān)病毒 | 既可以感染分裂細胞，也可以感染靜止細胞，免疫反應輕微。 | 攜帶外源基因的能力有限，整合時需要輔助病毒感染才能復制，滴度較低。 |
慢病毒載體
慢病毒載體是一種新型的基因轉(zhuǎn)移載體，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，為二倍體RNA病毒，幾乎能夠感染所有組織來源的細胞，可通過逆轉(zhuǎn)錄酶將病毒RNA逆轉(zhuǎn)為DNA，通過病毒整合酶整合入宿主細胞基因組，使被感染的細胞及其子代細胞長期穩(wěn)定表達病毒基因。常見的慢病毒有：HIV（人類免疫缺陷病毒）、FIV（貓免疫缺陷病毒）以及EIAV（馬傳染性貧血病毒）等。
慢病毒載體系統(tǒng) 是目前廣泛使用的基因操作工具，已從第一代發(fā)展到至今的第三代，其穩(wěn)定性及生物安全性不斷改進和提高。
慢病毒載體系統(tǒng)由pGCSIL-GFP載體、pHelperl.0(gag/pol元件)載體、pHelper2.0(VSVG元件)載體三質(zhì)粒組成，其中pGCSIL-GFP載體含有能持續(xù)表達小RNA的元件，同時能表達熒光蛋白GFP，pHelperl.0和pHelper2.0含有病毒包裝所必需的元件。
pGCSIL-GFP 質(zhì)粒圖譜
pHelperl.0 質(zhì)粒圖譜
?
pHelper2.0 質(zhì)粒圖譜
普健生物具有完善慢病毒包裝平臺，可以完成慢病毒包裝，穩(wěn)定細胞系的構(gòu)建。
普健生物慢病毒包裝服務流程
1.構(gòu)建慢病毒RNAi干擾載體，質(zhì)粒提取。
2.慢病毒載體和包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細胞。
3.培養(yǎng)48~72小時，收集含有病毒的上清培養(yǎng)液。
4.病毒的純化，濃縮，分裝，-80℃保存。
5.目的基因滴度檢測。
6.實驗報告。
