盤點重組蛋白表達異常的一些常見解決辦法

　　之前我們和大家聊過有關重組蛋白表達因為設計問題而導致的表達異常情況，可以說，它是蛋白表達失敗很重要的一個原因。今天，我們再和大家聊聊有關因為操作方面失誤而導致的相關問題，希望對大家的實驗有所幫助。

　　其實，重組蛋白表達失誤的情況并不少見，只要注意如下幾點，一般都不成問題。

　　1、質(zhì)粒構建問題。當我們在完成質(zhì)粒構建后，除了普通的酶切鑒定和PCR鑒定外，還需要進行質(zhì)粒的測序工作，只有在確保無任何突變的情況下，我們才能對其進行下一步實驗。當然了，出現(xiàn)序列缺失或多余的情況就更不能進行實驗了;

　　2、宿主菌確定。在進行表達之前，我們需要確定宿主菌是正確可用的，如果有問題，則會直接造成表達失敗;

　　3、蛋白降解問題。一般來說，宿主菌內(nèi)存在很多蛋白酶，它會造成蛋白的降解。所以，很多情況下，并不是蛋白沒有表達，而是表達出來后又被降解了，這樣，也很難讓我們檢測到蛋白的存在。一般這個時候，我們需要加入一些藥劑來抑制蛋白酶的產(chǎn)生;

　　4、培養(yǎng)基問題。選錯培養(yǎng)基，或者選擇的培養(yǎng)基營養(yǎng)液錯誤，也可能會造成表達失敗(選擇合適的培養(yǎng)基即可);

　　5、分子異常情況。蛋白的分子量或大小等相關因素與預期偏差較大，這個可以說是因為設計或者中間過程出現(xiàn)了偏差導致，我們需要進行相關分析后再次進行表達;

　　總的來說，因為操作錯誤導致蛋白表達異常的情況還是比較多的，這就要求我們在日常實驗中多注重細節(jié)問題，只有做好了這些方面的工作，才能保證重組蛋白的高效表達。當然了，影響蛋白表達的因素還有很多，這就需要我們做好各類檢測工作，只有達到了相應的需求后，才能進一步保障實驗的成功率。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務，如果您有相關需求，歡迎來電咨詢。