大腸桿菌表達(dá)重組蛋白時(shí)最常會(huì)遇到五個(gè)問題

　　大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)作為最常用來進(jìn)行蛋白表達(dá)的五大系統(tǒng)之一，已經(jīng)算得上是非常成熟地表達(dá)系統(tǒng)了。相對其他系統(tǒng)而言，其遺傳背景清晰、操作簡單、表達(dá)水平高、成本低、周期短等特點(diǎn)，使得其的使用非常的廣泛，重組蛋白表達(dá)也常常會(huì)使用到大腸桿菌。那么，您知道大腸桿菌表達(dá)重組蛋白時(shí)常常會(huì)遇到哪些問題嗎?今天普健生物就和您具體聊聊。

　　1、為什么要用到大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)?它的優(yōu)勢有哪些?

　　我們之前說到過，大腸桿菌繁殖速度快，大概20分鐘就能實(shí)現(xiàn)倍增，而且轉(zhuǎn)染率高;容易實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)，可以通過溫度來實(shí)現(xiàn)直接控制;

　　2、哪些方法可以去除蛋白標(biāo)簽?

　　去除重組蛋白標(biāo)簽的方法主要有兩種：酶消化法和化學(xué)裂解法。酶消化法其實(shí)就是利用腸激酶、凝血酶、煙草蝕刻病毒蛋白酶等去溢出蛋白標(biāo)簽的方式，是現(xiàn)階段最常用的標(biāo)簽去除方法?；瘜W(xué)裂解法他剛才用于融合伴侶蛋白的移除，使用范圍相對來說要窄一些，但是勝在價(jià)格便宜;

　　3、所謂的最合適的表達(dá)宿主有哪些?

　　其實(shí)所的最合適的表達(dá)宿主需要結(jié)合實(shí)際情況以及蛋白需求來進(jìn)行選擇，成本投入不同、技術(shù)實(shí)力不同等選擇的宿主也是各不相同。重組蛋白原核表達(dá)最常采用BL21和K-12來作為表達(dá)宿主;

　　4、為什么會(huì)出現(xiàn)低表達(dá)甚至無表達(dá)?

　　誘導(dǎo)前后蛋白純在毒素或者表達(dá)過程中密碼子有偏向性都會(huì)造成蛋白表達(dá)過低或是無表達(dá)的情況。我們可以通過控制本底表達(dá)水平、控制誘導(dǎo)表達(dá)水平、優(yōu)化質(zhì)粒DNA等方式來進(jìn)行調(diào)控;

　　5、蛋白包涵體形成的原因有哪些?

　　蛋白形成的過程中如果形成了不正確的二硫鍵、出現(xiàn)錯(cuò)誤折疊、缺少翻譯后修飾等過程都可能會(huì)造成蛋白包涵體形成。我們可以通過表達(dá)分子伴侶、移除誘導(dǎo)劑、低溫誘導(dǎo)表達(dá)、改變?nèi)诤习閭H蛋白、該表表達(dá)宿主等一系列的方式來解決這個(gè)問題;

　　總的來說，這些都是我們在操作中會(huì)出現(xiàn)的一些小問題，但是，也恰恰是這些小問題制約重組蛋白表達(dá)成功與否。所以，在進(jìn)行重組蛋白表達(dá)時(shí)，我們需要有專業(yè)的技術(shù)支持，用于解決各類可能會(huì)在遇到的問題。作為一家擁有十余年蛋白抗體制備經(jīng)驗(yàn)的公司來說，普健生物專業(yè)為廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)的蛋白抗體制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。