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自1975年Kohler和Milstein首次描述通過(guò)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體(mab)的方法以來(lái)，單克隆抗體已成為必不可少的研究試劑和非常成功的治療分子。由于疾病靶標(biāo)在物種間的高序列保守性(使免疫變得困難)、受限的解剖位置(例如中樞神經(jīng)系統(tǒng))、難以純化可溶性形式(例如gpcr)以及有時(shí)需要靶向疾病狀態(tài)特異性的瞬時(shí)或不穩(wěn)定構(gòu)象，因此通過(guò)抗體干預(yù)來(lái)調(diào)節(jié)疾病靶標(biāo)變得更具挑戰(zhàn)性。
盡管雜交瘤方法已經(jīng)徹底改變了單克隆抗體的使用，但由于依賴于融合事件，該技術(shù)相對(duì)低效。噬菌體展示技術(shù)也被廣泛用作生產(chǎn)單克隆抗體的技術(shù)。然而，在文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程中發(fā)生的抗體可變區(qū)基因的隨機(jī)組合導(dǎo)致天然同源重鏈和輕鏈配對(duì)的丟失，而這些重鏈和輕鏈配對(duì)是在體內(nèi)免疫應(yīng)答過(guò)程中進(jìn)化和選擇的。由于這種隨機(jī)配對(duì)，來(lái)自抗體文庫(kù)的抗體通常需要體外成熟，以在作為治療分子進(jìn)展之前賦予增加的親和力和穩(wěn)定性。
近年來(lái)單B細(xì)胞技術(shù)獲得了許多科學(xué)家的青睞，單B細(xì)胞技術(shù)平臺(tái)保留了自然的重鏈和輕鏈配對(duì)，避免了低效的雜交瘤融合步驟，從而能夠有效地挖掘免疫B細(xì)胞群。這有助于發(fā)現(xiàn)罕見的抗體，這些抗體可能具有獨(dú)特的高度理想的特性，以及產(chǎn)生大量不同的抗體。在克隆抗體基因的過(guò)程中，保留天然的重鏈和輕鏈配對(duì)有利于產(chǎn)生具有吸引力的親和力、特異性和穩(wěn)定性的重組抗體。
流式細(xì)胞術(shù)已被用于從免疫、接種疫苗或感染后7天的獻(xiàn)血者血液中分離出單個(gè)漿母細(xì)胞。在此期間，質(zhì)母細(xì)胞短暫地出現(xiàn)在外周，并提供豐富的抗原特異性B細(xì)胞群供選擇。然而，分選不包括抗原結(jié)合步驟，盡管群體豐富，但從這些漿質(zhì)母細(xì)胞中回收抗原特異性重組抗體的比例可低至10%。
在相關(guān)的文獻(xiàn)研究中，除了Manz等人以及最近的Carroll和al - rubeai[20]和Taddeo等人的研究外，流式細(xì)胞術(shù)尚未常規(guī)應(yīng)用于抗原反應(yīng)性IgG分泌細(xì)胞的鑒定。這主要是由于缺乏表面免疫球蛋白，排除了用靶抗原染色特定細(xì)胞的選擇。然而，FACS已被成功用于鑒定抗原特異性記憶B細(xì)胞，表達(dá)表面IgG作為B細(xì)胞受體的一部分。Weitkamp等(2003)利用熒光病毒樣顆粒(VLPs)在96孔板上鑒定并將輪狀病毒特異性的人單B細(xì)胞分選到單孔中，然后進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)抗體分泌。Amanna和Slifka設(shè)計(jì)了一種FACS方法，用于臨床樣本中破傷風(fēng)和白喉抗原特異性記憶B細(xì)胞的鑒定和定量。然而，他們沒(méi)有將其擴(kuò)展到單細(xì)胞分選和進(jìn)一步分析。di Niro等人描述了輪狀病毒特異性B細(xì)胞分選后立即進(jìn)行單細(xì)胞RT-PCR。
普健生物（我們）建立了噬菌體展示抗體文庫(kù)技術(shù)平臺(tái)以及新型的 Xten™ Mab Single B 兔單克隆抗體開發(fā)技術(shù)平臺(tái)。利用B細(xì)胞分選富集策略，在流式分選設(shè)備的支持下，有效富集抗原特異性B細(xì)胞，提高B細(xì)胞體外培養(yǎng)的成活率，保留B細(xì)胞的多樣性，可開發(fā)出不同應(yīng)用需求的抗體。這些抗體具有多重優(yōu)勢(shì)：
高特異性：與小鼠和其他嚙齒動(dòng)物相比，兔免疫系統(tǒng)更優(yōu)秀，產(chǎn)生的抗體特異性更強(qiáng)，親和力更高
高穩(wěn)定性：與常規(guī)小鼠生產(chǎn)的單克隆抗體相比，兔IgG結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性高
高親和力：兔的B細(xì)胞成熟過(guò)程產(chǎn)生的親和力是嚙齒動(dòng)物的10-100倍
高多樣性：兔擁有豐富的B細(xì)胞反應(yīng)庫(kù)，其產(chǎn)生的抗體在表位變異、突變、構(gòu)象變化等方面優(yōu)勢(shì)顯著，且多樣性高
單B細(xì)胞篩選策略避免了雜交瘤融合和組合展示，已成為高效采集免疫動(dòng)物和人天然抗體庫(kù)的重要技術(shù)。使用一系列方法檢測(cè)不同B細(xì)胞亞群是一種有吸引力的選擇，可確保產(chǎn)生大量和多樣化的高質(zhì)量抗體組合。多種抗體的產(chǎn)生以及發(fā)現(xiàn)罕見的具有獨(dú)特和理想特征的產(chǎn)生IgG的B細(xì)胞克隆的能力，有助于鑒定適合目的的分子，并可開發(fā)成治療藥物或研究試劑。
