關(guān)于重組蛋白表達及其純化你知道多少?

　　關(guān)于重組蛋白，相信一些有一點技術(shù)的公司都可以做表達出來，但是，如果想要將蛋白用于下游實驗，那么，成功表達的重組蛋白就顯得非常的重要了。蛋白并不是說表達出來就行，而是需要為后續(xù)的實驗提供有效助力，如果在一開始的時候就優(yōu)化了蛋白的可溶性，那么，后續(xù)的實驗將會得到極大的簡化。因此，為重組蛋白選擇一款正確的標簽就顯得非常重要了。

　　常用的標簽中都有什么?

　　很多人對于“正確”這個詞有著一定的誤解，只是覺得挑選一個標簽讓蛋白得以表達即可。其實不然，所選的標簽需要幫助我們獲得可溶性蛋白，不僅簡化相應(yīng)的蛋白純化方案，更是不會對后續(xù)實驗產(chǎn)生影響，甚至起到促進作用。所以，對于那些具備多個切割位點的蛋白來說，我們需要考慮的問題就是蛋白的溶解、表達以及純化點是否可以切除，以及切除這個點是否會影響到后續(xù)目的蛋白的行為。

　　如何獲得可溶性蛋白?

　　對于重組蛋白來說，它在真核細菌中表達時，最常見的問題就是不溶。所以，想要使得其可溶性提升，需要結(jié)合如下三個方面來進行考慮。

　　1、IPTG濃度

　　簡單來說，就是控制好IPTG的濃度，可以嘗試多幾個不同的濃度，選擇一下，看哪個濃度能夠提供最高的可溶性蛋白濃度;

　　2、溫度

　　首先，我們選擇37度的典型溫度來進行生長和誘導(dǎo)分離，一般來說，在更低的溫度下蛋白的表達程度更高。然后，我們可以分別嘗試在30度、25度、18度等條件下進行誘導(dǎo)，選擇最佳誘導(dǎo)溫度后，再加入IPTG;

　　3、誘導(dǎo)時間

　　當然了，誘導(dǎo)的時間并非越長越好，對于那些“有毒蛋白”顯得尤為明顯。一般來說，我們在誘導(dǎo)時，選擇隔幾個小時取一次樣，并檢查目的蛋白的表達量;

　　當然了，如果通過如上這些手段都沒有達到我們的要求，那么，我們可以考慮通過只表達蛋白的一部分，或者選擇不同的表達系統(tǒng)來進行表達，甚至保留目的蛋白的翻譯后修飾?？偟膩碚f，通過多次的實驗總會獲得我們所需的重組蛋白。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。