抗狂犬病病毒單克隆抗體制劑臨床應(yīng)用進(jìn)展與展望

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起、嚴(yán)重侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的烈性傳染病，一旦發(fā)病，病死率接近100%。WHO狂犬病疫苗立場(chǎng)文件認(rèn)定所有首次暴露的Ⅲ級(jí)暴露者以及患有嚴(yán)重免疫缺陷、長(zhǎng)期大量使用免疫抑制劑、頭面部暴露的Ⅱ級(jí)暴露者均應(yīng)在狂犬病暴露后預(yù)防處置時(shí)使用被動(dòng)免疫制劑。

抗病毒單克隆抗體制劑在呼吸道合胞病毒感染等病毒性疾病防治中的有效性已經(jīng)得到充分驗(yàn)證。近年來，抗狂犬病病毒單克隆抗體先后在印度、中國(guó)等國(guó)家進(jìn)入臨床應(yīng)用，在一定程度上緩解了這些國(guó)家需要使用狂犬病被動(dòng)免疫制劑的狂犬病暴露人群中被動(dòng)免疫制劑應(yīng)用不足的問題。當(dāng)前，臨床應(yīng)用的狂犬病單抗主要是針對(duì)狂犬病病毒糖蛋白單一抗原表位的單個(gè)單克隆抗體（后續(xù)簡(jiǎn)稱單抗）制劑。2018年世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）狂犬病疫苗立場(chǎng)文件鼓勵(lì)在條件允許的情況下使用狂犬病單抗代替狂犬病免疫球蛋白（rabies immunoglobulin，RIG）；同時(shí)，明確將開發(fā)含有2種或2種以上具有不重疊表位的單抗產(chǎn)品列為優(yōu)先發(fā)展領(lǐng)域，因?yàn)榇祟悊慰菇M合制劑將提高中和狂犬病病毒的有效性和范圍。目前，全球范圍內(nèi)狂犬病單抗組合制劑的研發(fā)、臨床試驗(yàn)在加速推進(jìn)，并且顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。

抗狂犬病病毒單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)
與傳統(tǒng)的馬源狂犬病免疫球蛋白（equine rabies immunoglobulin，ERIG）、狂犬病人免疫球蛋白（human rabies immunoglobulin，HRIG）相比，抗狂犬病病毒單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)主要包括：

（3）與人IgG抗體結(jié)構(gòu)高度相同，純度高，人體耐受性好，最大限度減少不良反應(yīng)發(fā)生；
（4）不存在血液制品的醫(yī)學(xué)倫理問題及血源性病原體污染的潛在風(fēng)險(xiǎn)；
（5）比活性高，效力高于RIG，且對(duì)人用狂犬病疫苗免疫干擾作用小。

抗狂犬病病毒單克隆抗體的制備技術(shù)
單克隆抗體技術(shù)已經(jīng)用于多種傳染病，尤其是病毒性疾病的治療性單克隆抗體的制備。單克隆抗體技術(shù)主要包括雜交瘤細(xì)胞技術(shù)、單個(gè)B細(xì)胞單克隆抗體技術(shù)、噬菌體抗體展示技術(shù)等。通過雜交瘤細(xì)胞系技術(shù)制備的鼠源狂犬病單抗（IgG）重鏈可變區(qū)（Fc）具有種屬特異性，需通過基因工程手段將其替換為人免疫球蛋白（IgG）Fc片段，生成人鼠嵌合狂犬病單抗。狂犬病單抗研發(fā)中，噬菌體抗體展示技術(shù)應(yīng)用較為普遍。

普健生物噬菌體展示抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)平臺(tái)擁有豐厚的技術(shù)積累和沉淀，提供構(gòu)建噬菌體展示抗體文庫(kù)、噬菌體展示多肽文庫(kù)、抗原表位篩選、抗體親和力成熟等技術(shù)服務(wù)。同時(shí)普健生物具有鼠源天然抗體文庫(kù)、兔源天然抗體文庫(kù)、納米抗體天然抗體文庫(kù)、重組全人源噬菌體抗體文庫(kù)等?；趪?yán)苛的QC檢測(cè)，可確?？偛迦肼始罢_率——片段插入率 100%，抗體序列正確率 >90%；具備抗體序列多樣性分析如種系基因（Germline）分析、互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）分析等。

噬菌體納米抗體文庫(kù)的構(gòu)建主要通過將羊駝體內(nèi)產(chǎn)生的天然缺失輕鏈的重鏈單域抗體的可變區(qū)片段展示到噬菌體表面來實(shí)現(xiàn)的，然后通過噬菌體展示篩選技術(shù)從羊駝抗體庫(kù)中篩選得到最適合的抗體序列。目前我們的羊駝養(yǎng)殖基地已經(jīng)正式運(yùn)營(yíng)，基地可提供每年近百頭成年羊駝?dòng)糜诿庖?，能穩(wěn)定提供大量的免疫抗原。

案例展示
普健生物構(gòu)建了千億級(jí)納米抗體文庫(kù)，并從文庫(kù)中篩選出針對(duì)新冠 NTD domain 的納米抗體。

基于抗狂犬病病毒單克隆抗體純度高、比活性高，可持續(xù)規(guī)?；a(chǎn)，且無血源病毒污染風(fēng)險(xiǎn)等優(yōu)勢(shì)，對(duì)抗狂犬病病毒單克隆抗體制劑的臨床前藥效學(xué)研究和臨床人體試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，該制劑對(duì)狂犬病病毒具有廣譜中和作用，與疫苗聯(lián)合應(yīng)用對(duì)疫苗的主動(dòng)免疫影響小，在狂犬病暴露后預(yù)防處置中具有良好的臨床應(yīng)用前景。


參考文獻(xiàn)
Lyu Xinjun,Dong Guanmu,Liu Xiaoqiang,ect. Progress and prospect of clinical application of anti-rabies virus monoclonal antibody preparation[J]. Chinese Medical Journal,2023,103(32)：2475-2479.