采用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)制備單克隆抗體的具體步驟及原理

　　雜交瘤細(xì)胞技術(shù)是最常用于制備單克隆抗體的方式，通過將骨髓瘤細(xì)胞與免疫后的B淋巴細(xì)胞相融合而形成的細(xì)胞。融合形成的這個(gè)細(xì)胞既可以避免B細(xì)胞無法無限增殖的缺點(diǎn)，又可以大量制備所需抗體。也正因?yàn)檫@個(gè)特性，使得其在臨床試驗(yàn)中得到了廣泛的應(yīng)用。那么，雜交瘤細(xì)胞技術(shù)的操作流程是怎樣的呢?

　　1、免疫小鼠。通過抗原提取或定制，得到純度較高的抗原，而后將其注入到小鼠體內(nèi)。當(dāng)然了，為了免疫成功，間隔一段時(shí)間后再次對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，多輪免疫后，確保免疫成功;

　　2、細(xì)胞提取。當(dāng)小鼠免疫成功后，提取出脾臟，并將其分離出來;

　　3、細(xì)胞融合。將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，形成雜交瘤細(xì)胞;

　　4、細(xì)胞篩選。將雜交瘤細(xì)胞放入培養(yǎng)基中，通過相關(guān)技術(shù)手段，篩選出合適的雜交瘤細(xì)胞;

　　5、細(xì)胞擴(kuò)增。將篩選出的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，并收集齊上清液;

　　6、蛋白純化。通過親和層析等技術(shù)，對(duì)所得單克隆抗體進(jìn)行純化;

　　7、蛋白鑒定。通過一些手段對(duì)單克隆抗體進(jìn)行特異性、親和力等方面特性的鑒定;

　　當(dāng)然了，隨著相關(guān)技術(shù)的不斷發(fā)展，各種單克隆抗體制備的技術(shù)營運(yùn)而生，如Single B兔單克隆抗體制備等技術(shù)。但是，其在技術(shù)需求方面有著一定的要求，需要結(jié)合實(shí)際情況來選擇。

　　大規(guī)模單克隆抗體制備的流程是怎樣的?

　　對(duì)于大規(guī)模單克隆抗體制備來說，在主要流程上大體相同，但是在一些細(xì)節(jié)方面有著一定的不同。

　　1、免疫小鼠。將抗原注入小鼠體內(nèi)，使得其產(chǎn)生免疫反應(yīng);

　　2、淋巴細(xì)胞分離。提取免疫成功后的小鼠脾細(xì)胞;

　　3、細(xì)胞融合。將脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合;

　　4、抗體篩選與鑒定。將雜交瘤細(xì)胞篩選和鑒定;

　　5、抗體生產(chǎn)。對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，大規(guī)模培養(yǎng)，而后實(shí)現(xiàn)抗體的大規(guī)模生產(chǎn);

　　相對(duì)其他抗體制備方式來說，雜交瘤細(xì)胞技術(shù)無論是在制備技術(shù)要求上還是制備成本上都有著極大的優(yōu)勢(shì)，適用于大部分抗體制備的情況。當(dāng)然了，雜交瘤技術(shù)也有著一定的局限性，比如操作步驟繁瑣、抗體鼠源性等，但是，相信隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，這些問題將會(huì)得到解決。更多有關(guān)雜交瘤技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，敬請(qǐng)關(guān)注普健生物。