盤點蛋白互作技術(shù)中最常用的四種技術(shù)

　　作為生命的主要承擔(dān)者，蛋白一直是科研項目中備受關(guān)注的一員。在生命體中，蛋白一直都不是單一運作的，往往需要很多蛋白共同配合來完場一個動作。這個時候，人們就提出了一個新的理念：蛋白互作?，F(xiàn)階段的蛋白互作技術(shù)您了解多少?下面，普健生物和大家具體聊聊。

　　什么是蛋白互作?

　　蛋白互作(PPls)其實就是一相細(xì)胞的基礎(chǔ)事件，他發(fā)生在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器的每一個生理過程中，蛋白之間的配合、作用，最終完成細(xì)胞所需的一次生理周期過程。

　　蛋白互作分析的意義?

　　蛋白互作分析能夠闡明蛋白質(zhì)的相互作用在何時、何地發(fā)生以及蛋白質(zhì)復(fù)合物如何形成為確定蛋白質(zhì)生物學(xué)功能提供了重要基礎(chǔ)。可以說，通過這項技術(shù)，我們能夠更好地對細(xì)胞進(jìn)行研究，以便于進(jìn)一步了解生命。

　　那么，蛋白互作分析的方法有哪些呢?

　　就目前而言，常用的蛋白互作分析方法主要有四種，具體如下：

　　1、親和純化及免疫共沉淀

　　免疫共沉淀技術(shù)簡稱COIP技術(shù)，是通過抗原抗體之間的特異性結(jié)合原理完成，通過在細(xì)胞裂解液中添加特異性抗體，使得抗原和抗體形成沉淀，而后在通過復(fù)合物觀察并驗證抗原與其他蛋白之間相互作用的方法;

　　這個方法能真實檢測體內(nèi)的生理情況，實驗條件溫和，并且可以分離到天然狀態(tài)的蛋白化合物。但是對于那些結(jié)合力弱的蛋白來說，效果就顯得差強人意了;

　　2、Pull Down

　　Pull-Down技術(shù)，其實就是利用相對固化并且標(biāo)記過后的標(biāo)簽蛋白從細(xì)胞裂解液中釣出與之相對應(yīng)的蛋白的方法。而后通過對那些被“釣”出來蛋白進(jìn)行研究，從而確定蛋白之間相互作用的關(guān)系。

　　3、雙分子熒光互補

　　雙分子熒光互補技術(shù)指的是通過將熒光蛋白的多肽鏈在不保守的氨基酸處切開，形成兩個多肽片段，而后將這兩個多肽片段分別鏈接到一對能發(fā)生互補作用的目標(biāo)蛋白上。當(dāng)這兩個蛋白相互作用時，會造成兩個分開的熒光蛋白互補，從而發(fā)出熒光;

　　4、酵母雙雜交實驗

　　酵母雙雜系統(tǒng)是當(dāng)前使用最為廣泛的一種方法，它通過將靶蛋白和誘導(dǎo)蛋白特異性結(jié)合，誘餌蛋白結(jié)合于報道基因的啟動子,啟動報道基因在酵母細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),如果檢測到報道基因的表達(dá)產(chǎn)物,則說明兩者之間有相互作用,反之則兩者之間沒有相互作用;

　　這四種方法各具特色，適合于不同的使用環(huán)境，我們在進(jìn)行相關(guān)實驗的時候，可以結(jié)合當(dāng)前的情況選擇最適合的方法。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白抗體表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。