原核表達(dá)重組蛋白的一般步驟以及一些注意事項(xiàng)

　　原核表達(dá)相信大家一定不會陌生，簡單來說，就是將需要表達(dá)的基因克隆到大腸桿菌中后，大量表達(dá)蛋白的一種方式，在蛋白純化、定位、功能分析等方面都有著廣泛的使用。那么，用大腸桿菌來表達(dá)重組蛋白有哪些好處?其步驟又是怎樣的呢?

　　大腸桿菌表達(dá)重組蛋白的好處：

　　1、控制簡單。之前我們就和大家聊過，大腸桿菌背景清晰，且易于成長和控制;

　　2、成本低。相對哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)來說，大腸感覺表達(dá)蛋白的成本相對更低;

　　3、質(zhì)粒選擇多。擁有各種各樣的大腸桿菌菌株及其與之匹配的質(zhì)粒，選擇更多;

　　原核表達(dá)重組蛋白的步驟如下：

　　1、獲得目的基因。通過基因重組技術(shù)獲得我們所需基因，并對其進(jìn)行基因測序，以保障目的基因準(zhǔn)確信;

　　2、準(zhǔn)備表達(dá)載體。從大腸桿菌中找出合適與表達(dá)這段序列的質(zhì)粒;

　　3、將目的基因插入載體中。將目的基因通過切段、植入等一系列的手段添加到質(zhì)粒中;

　　4、宿主菌培養(yǎng)。對宿主菌進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增;

　　5、誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。通過外部環(huán)境刺激，誘導(dǎo)所需蛋白得以表達(dá);

　　6、蛋白分析。對所得蛋白在特異性、活性等方面進(jìn)行檢測，看其是否為所需蛋白;

　　7、擴(kuò)增及純化。對符合需求的宿主菌進(jìn)行擴(kuò)增，而后進(jìn)行大批量蛋白生產(chǎn)及純化;

　　大腸桿菌表達(dá)重組蛋白的注意事項(xiàng)：

　　1、需要根據(jù)蛋白的最終應(yīng)用來考慮表達(dá)載體，可選擇融合表達(dá);

　　2、融合表達(dá)時，外源DNA不能對轉(zhuǎn)錄、翻譯的過程造成干擾;

　　大家應(yīng)該不難看出，原核表達(dá)重組蛋白的方式其實(shí)和普通原核蛋白表達(dá)的方式?jīng)]有太大的不同，只是說在獲得目的基因的方式上有所不同，而且需要選擇特定的質(zhì)粒才能實(shí)現(xiàn)蛋白的表達(dá)。而就其他步驟而言，相差表達(dá)，但是在一些細(xì)節(jié)方面肯定會有所不同，這就需要有相關(guān)的經(jīng)驗(yàn)來輔助了。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。

本文網(wǎng)址：http://www.evonsdesigns.com/archive/632.html，轉(zhuǎn)載請標(biāo)明出處，謝謝！