穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的一般流程是怎樣的?

　　穩(wěn)定細(xì)胞株篩選技術(shù)在生物技術(shù)工程中是一項(xiàng)非常常用的技術(shù)，通過(guò)這個(gè)操作，能夠篩選出可以穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞株。我們知道，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的目的就是為了能夠得到可以持續(xù)表達(dá)的細(xì)胞，所以，篩選過(guò)程類似提純的過(guò)程。那么，穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的一般流程是怎樣的呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。

　　1、載體構(gòu)建。選擇合適的載體，然后將目的基因的DAN序列或蛋白編碼序列克隆到合適的表達(dá)載體中，并構(gòu)建成重組質(zhì)粒;

　　2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將構(gòu)建好的載體通過(guò)試單更多技術(shù)轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中(通常采用化學(xué)發(fā)、電穿孔法或病毒載體介導(dǎo)等方法)，通過(guò)細(xì)胞來(lái)進(jìn)行目標(biāo)蛋白的表達(dá);

　　3、選擇標(biāo)記引入。轉(zhuǎn)染后，將選中標(biāo)記引入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，從中挑選包含標(biāo)記的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，無(wú)標(biāo)記的則剔除掉(這個(gè)方法對(duì)蛋白表達(dá)本身沒(méi)有太大意義，但是能夠幫助我們挑選出包含目的基因的細(xì)胞);

　　4、單克隆挑選。將進(jìn)過(guò)篩選后的細(xì)胞進(jìn)行單克隆培養(yǎng)，篩選出能夠穩(wěn)定表達(dá)且高表達(dá)的細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行克隆;

　　5、穩(wěn)定性驗(yàn)證。對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行驗(yàn)證，確保目的基因的穩(wěn)定高效表達(dá);

　　6、功能性驗(yàn)證。對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞株進(jìn)行功能型驗(yàn)證，以確保所得蛋白能夠我們的需求;

　　總的來(lái)說(shuō)，穩(wěn)定細(xì)胞株篩選是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，需要具備相當(dāng)程度的耐性和細(xì)心，知道獲得自己所需目的基因的細(xì)胞株為止。普健生物作為一家具備多年蛋白抗體制備和定制經(jīng)驗(yàn)的公司，專業(yè)為您提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建及篩選服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。