穩(wěn)定細(xì)胞株的概念簡(jiǎn)介以及它的構(gòu)建方法

　　當(dāng)我們一些實(shí)驗(yàn)需求時(shí)，我們常常會(huì)用到穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)，比如：需要頻繁轉(zhuǎn)染、提升基因干擾效果、需要進(jìn)行極高拷貝數(shù)的表達(dá)等等。而穩(wěn)定細(xì)胞株技術(shù)就是在活細(xì)胞的狀態(tài)下，通過大量多代的培養(yǎng)所得的細(xì)胞。這類細(xì)胞不僅具有正常的生理功能，而且可以實(shí)現(xiàn)無限繁殖，能夠穩(wěn)定地表達(dá)蛋白。

　　穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建主要包括如下過程：

　　1、構(gòu)建載體。

　　2、轉(zhuǎn)染、感染。

　　3、目的蛋白檢測(cè)。

　　4、抗生素篩選。

　　5、目的蛋白再次檢測(cè)。

　　6、細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測(cè)。

　　穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建一般采用兩種方法：體質(zhì)轉(zhuǎn)染后的單克隆穩(wěn)定株;二是應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染，從而篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。

　　通常情況下，我們會(huì)將質(zhì)粒整合到染色體上，然后用相應(yīng)的質(zhì)粒中的DNA去篩選細(xì)胞核，形成穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。

　　細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細(xì)胞系(cell line)， 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限， 可稱為有限細(xì)胞系(finite cell line)， 如可以連續(xù)培養(yǎng)， 則稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuous cell line)， 培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。

　　采用穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)能夠在極大程度上保持細(xì)胞的穩(wěn)定性，從而穩(wěn)定地提供蛋白產(chǎn)品，讓其不會(huì)因?yàn)椴煌?xì)胞而產(chǎn)生蛋白差異的現(xiàn)象。而且大量表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株可以在更大程度上解決大批量基因片段引入的問題，實(shí)現(xiàn)更好地表達(dá)。普健生物是一家擁有15年蛋白抗體生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的企業(yè)，專業(yè)為廣大用戶提供蛋白抗體制備服務(wù)，優(yōu)質(zhì)的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)，為您解決各類蛋白抗體需求。