穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的流程及其難點分析

　　就目前來說，穩(wěn)定細(xì)胞株和過表達(dá)細(xì)胞株是基因研究中最常用的方法，同時通過RNA感染技術(shù)，即可實現(xiàn)我們常說的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建。這個方法相對來說相對困難，需要有一定技術(shù)實力的公司才能實現(xiàn)。有鑒于此，普健生物就在這里和大家具體聊聊有關(guān)穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的流程及其重點難點分析。

　　穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建流程：

　　1、構(gòu)建載體。通過過表達(dá)或干擾載體的操作獲得合適的載體細(xì)胞;

　　2、病毒包裝。通過慢病毒包裝以及相關(guān)操作，獲得適合用于感染的病毒;

　　3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將病毒轉(zhuǎn)染到目的細(xì)胞中，并篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞株培養(yǎng);

　　4、藥物篩選。通過提純和篩選，獲得高純度的目的蛋白溶液;

　　5、蛋白功能分析。采用各種試劑進(jìn)行蛋白的相關(guān)功能分析，看其是否能夠能夠滿足我們的需求;

　　這個時候大家可能就覺得非常的奇怪了，明明這么簡單的幾個步驟，怎么就困難了呢?下面，我們和大家具體分析一下穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的難點所在。

　　1、所用細(xì)胞不合適。一般來說，很多懸浮細(xì)胞對病毒的轉(zhuǎn)染效果并不好，而且操作過程非常的困難。還有就是對于那些極度敏感的細(xì)胞來說，病毒的入侵可能直接造成細(xì)胞的死亡;

　　2、病毒超過了過表達(dá)細(xì)胞穩(wěn)定性的極限。基因會通過病毒隨機(jī)插入到目的細(xì)胞的基因組中，而插入的基因可能會對已經(jīng)過表達(dá)細(xì)胞的穩(wěn)定性造成影響，直接造成其無法表達(dá)的情況?；蛘咴诤罄m(xù)細(xì)胞傳代中，會出現(xiàn)基因表達(dá)逐漸下降的情況;

　　3、安全性不佳以及成本高。一般來說病毒操作的成本都很高，即便幾千塊的病毒包裝都需要2-3周的時間去實現(xiàn)。而且病毒對人體都存在著一定的感染性，需要的實驗室安全等級也較高;

　　4、病毒優(yōu)化和存儲性問題。不同批次的病毒都會存在著一定的差異，所以，每次實驗都需要對病毒進(jìn)行相關(guān)的檢測，以保證使用最優(yōu)病毒進(jìn)行實驗。同時，病毒都需要在-80度的環(huán)境下保存，時間超過2周都會出現(xiàn)活性下降的情況;

　　總的來說，進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建需要有更高的實驗成本和安全成本，只有在滿足了這兩項需求的前提下，我們才可以進(jìn)行后續(xù)的操作。而在進(jìn)行實驗的時候，我們需要針對其重點難點做好相應(yīng)的備份和準(zhǔn)備工作，這樣就需要有更高的技術(shù)去做支撐。只有做好了這些方面的工作，才能保證穩(wěn)定細(xì)胞株得以構(gòu)建。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。